【科學實驗】日立L-2000高效液相色譜儀操作規(guī)程
一、準備工作
1)色譜條件的選擇:選擇色譜柱、流動相、檢測器
2) 流動相配制:采用“HPLC” 級溶劑,水采用純化水。配制方法見相關(guān)質(zhì)量標準,使用前用0.45μm有機系濾膜過濾。流動相進行超聲波脫氣(或真空脫氣、氦脫氣),脫氣不少于 15min,除去溶解的氣體。然后將泵上末端帶有吸濾頭的輸液管插到處理好的流動相貯液瓶中。
3)樣品配制:要采用0.45μm或更小孔徑濾膜過濾,裝于樣品瓶中,然后放于進樣器的樣品架上準備測定。
二、啟動儀器
1)打開組織器(最上面模塊)的電源開關(guān),按泵、進樣器、柱溫箱、檢測器的順序打開LC各模塊電源開關(guān)及PC電源。
2)雙擊桌面上 圖標,啟動軟件。
3)點擊“系統(tǒng)狀態(tài)”按鈕,點擊“初始化” ,狀態(tài)由 “待機”轉(zhuǎn)為“連接中”,確認各模塊的連接狀態(tài)。
三、凈化流路
1)打開泵排液閥(下面模塊左側(cè)圓形閥門,逆時針旋轉(zhuǎn)約180°) 。
2)單擊“凈化”按鈕,送液約2分鐘后,單擊“關(guān)閉凈化”按鈕,并關(guān)閉泵排液閥(下面模塊左側(cè)圓形閥門,順時針,不要擰太緊!)。
四、建立方法文件 建立樣品表
1) 在“文件”菜單中選擇“新建” “方法” 。在“方法” 中,經(jīng)常需要調(diào)整的測量方法部分:梯度模式、流動相比例、柱溫、采集時間、定量計算方法等。點擊“更新方法文件”按鈕。完成方法設置,保存。
2)在“文件”菜單中選擇“新建” “樣品表” 。填入樣品瓶放置位置的編號,進樣體積,樣品名稱,方法名稱等,完成對樣品表的編輯,保存。
五、樣品測定
點擊“數(shù)據(jù)采集”按鈕,彈出開始分析界面,儀器開始按照“方法”中設定的流動相和波長開始走基線,當基線平穩(wěn),壓力穩(wěn)定(通常在同一流動相平衡半小時以后)后,點擊“單分析的開始”或“系列開始”按照樣品表編制的順序測定樣品。
六、數(shù)據(jù)的處理和報告的生成
1) 點擊“數(shù)據(jù)處理”圖標,選擇記錄的數(shù)據(jù),雙擊或單擊“顯示”。選擇合適的報告形式,可以讓數(shù)據(jù)按要求呈現(xiàn)在我們面前,并且保存到常用的格式中去。
2)常用的兩種報告形式:一種比較全面的報告(詳細版);一種是簡明報告(簡明版)。這兩種報告可以根據(jù)要求自己編輯。點擊“打印”按鈕,可以生產(chǎn)PDF文檔,方便查閱。
七、關(guān)機
1)實驗結(jié)束后,首先關(guān)閉檢測器開關(guān)。
2)然后用90%的甲醇或乙腈以1mL/min的流速沖洗色譜柱及管路30分鐘。若流動相中有緩沖溶液,實驗完畢后應先用純水以1mL/min的流速沖洗色譜柱30分鐘,再用90%的甲醇沖洗。
3)依次關(guān)閉柱溫箱、進樣器、泵、計算機的電源開關(guān)。
4)登記儀器使用情況,做好整理和清潔工作。
注意事項:
1)柱壓異常升高時,考慮在線過濾器堵塞,可將其拆下,超聲清洗(可使用純凈水或者5%-10%硝酸溶液)。
2)柱壓異常降低時,考慮系統(tǒng)漏液。
3)柱壓不穩(wěn)定時,考慮入口單向閥、出口單向閥堵塞,可在專業(yè)人員指導下,拆下超聲清洗。
4)輸液管持續(xù)出現(xiàn)氣泡時,考慮流動相濾頭污染,可將其拆下,超聲清洗(可使用純凈水或者5%-10%硝酸溶液)。
5)當儀器報警,同時儀器屏幕顯示【LEAK ERROR】時,考慮漏液傳感器處有液體或灰塵存在,目視檢查并小心擦拭。
6)儀器長時間不用時,柱子及管路內(nèi)部應充滿甲醇。
7)使用中注意流動相瓶中溶液情況,不要流盡,切忌使泵空轉(zhuǎn)。
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