【科學實驗】日立L-2000高效液相色譜儀操作規(guī)程
一、準備工作
1）色譜條件的選擇：選擇色譜柱、流動相、檢測器
2） 流動相配制：采用“HPLC” 級溶劑，水采用純化水。配制方法見相關(guān)質(zhì)量標準，使用前用0.45μm有機系濾膜過濾。流動相進行超聲波脫氣（或真空脫氣、氦脫氣），脫氣不少于 15min，除去溶解的氣體。然后將泵上末端帶有吸濾頭的輸液管插到處理好的流動相貯液瓶中。
3）樣品配制：要采用0.45μm或更小孔徑濾膜過濾，裝于樣品瓶中，然后放于進樣器的樣品架上準備測定。
二、啟動儀器
1）打開組織器（最上面模塊）的電源開關(guān)，按泵、進樣器、柱溫箱、檢測器的順序打開LC各模塊電源開關(guān)及PC電源。
2）雙擊桌面上 圖標，啟動軟件。
3）點擊“系統(tǒng)狀態(tài)”按鈕，點擊“初始化” ，狀態(tài)由 “待機”轉(zhuǎn)為“連接中”，確認各模塊的連接狀態(tài)。
三、凈化流路
1）打開泵排液閥（下面模塊左側(cè)圓形閥門，逆時針旋轉(zhuǎn)約180°） 。
2）單擊“凈化”按鈕，送液約2分鐘后，單擊“關(guān)閉凈化”按鈕，并關(guān)閉泵排液閥（下面模塊左側(cè)圓形閥門，順時針，不要擰太緊！）。
四、建立方法文件 建立樣品表
1） 在“文件”菜單中選擇“新建” “方法” 。在“方法” 中，經(jīng)常需要調(diào)整的測量方法部分：梯度模式、流動相比例、柱溫、采集時間、定量計算方法等。點擊“更新方法文件”按鈕。完成方法設置，保存。
2）在“文件”菜單中選擇“新建” “樣品表” 。填入樣品瓶放置位置的編號，進樣體積，樣品名稱，方法名稱等，完成對樣品表的編輯，保存。
五、樣品測定
點擊“數(shù)據(jù)采集”按鈕，彈出開始分析界面，儀器開始按照“方法”中設定的流動相和波長開始走基線，當基線平穩(wěn)，壓力穩(wěn)定（通常在同一流動相平衡半小時以后）后，點擊“單分析的開始”或“系列開始”按照樣品表編制的順序測定樣品。
六、數(shù)據(jù)的處理和報告的生成
1） 點擊“數(shù)據(jù)處理”圖標，選擇記錄的數(shù)據(jù)，雙擊或單擊“顯示”。選擇合適的報告形式，可以讓數(shù)據(jù)按要求呈現(xiàn)在我們面前，并且保存到常用的格式中去。
2）常用的兩種報告形式：一種比較全面的報告（詳細版）；一種是簡明報告（簡明版）。這兩種報告可以根據(jù)要求自己編輯。點擊“打印”按鈕，可以生產(chǎn)PDF文檔，方便查閱。
七、關(guān)機
1）實驗結(jié)束后，首先關(guān)閉檢測器開關(guān)。
2）然后用90%的甲醇或乙腈以1mL/min的流速沖洗色譜柱及管路30分鐘。若流動相中有緩沖溶液，實驗完畢后應先用純水以1mL/min的流速沖洗色譜柱30分鐘，再用90%的甲醇沖洗。
3）依次關(guān)閉柱溫箱、進樣器、泵、計算機的電源開關(guān)。
4）登記儀器使用情況，做好整理和清潔工作。
注意事項：
1）柱壓異常升高時，考慮在線過濾器堵塞，可將其拆下，超聲清洗（可使用純凈水或者5%-10%硝酸溶液）。
2）柱壓異常降低時，考慮系統(tǒng)漏液。
3）柱壓不穩(wěn)定時，考慮入口單向閥、出口單向閥堵塞，可在專業(yè)人員指導下，拆下超聲清洗。
4）輸液管持續(xù)出現(xiàn)氣泡時，考慮流動相濾頭污染，可將其拆下，超聲清洗（可使用純凈水或者5%-10%硝酸溶液）。
5）當儀器報警，同時儀器屏幕顯示【LEAK ERROR】時，考慮漏液傳感器處有液體或灰塵存在，目視檢查并小心擦拭。
6）儀器長時間不用時，柱子及管路內(nèi)部應充滿甲醇。
7）使用中注意流動相瓶中溶液情況，不要流盡，切忌使泵空轉(zhuǎn)。
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