反相液相色譜柱原理及運(yùn)用維護(hù)介紹
反相液相色譜柱原理介紹
反相液相色譜柱是根據(jù)溶質(zhì)、極性活動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜形式，任何一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在液相色譜中這是運(yùn)用面較廣的一種別離形式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，活動(dòng)相多選用酸性的、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑，很多運(yùn)用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少數(shù)高聚物微球。
反相液相色譜柱的運(yùn)用和維護(hù)
在日常別離剖析工作中，反相液相色譜柱的正確運(yùn)用和維護(hù)十分重要，色譜柱運(yùn)用是否妥當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)下降柱效、縮短運(yùn)用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需求留意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
(1)柱子在裝卸、替換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，避免柱床產(chǎn)生空地。
(2)假如儀器用來(lái)做慣例剖析，樣品種類(lèi)有限，但剖析次數(shù)多，則不妨為每一類(lèi)慣例剖析配置一根專(zhuān)用柱，這樣有助于延伸柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械轟動(dòng)。溫度的忽然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的忽然升高或下降也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)理流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
(4)應(yīng)逐
漸改動(dòng)溶劑的組成，特別是反相色譜中，不該直接從有機(jī)溶劑改動(dòng)為全部是水，反之亦然。
(5)如運(yùn)用柱溫操控設(shè)備時(shí)，應(yīng)留意在通人活動(dòng)相后才干升溫。
(6)一般說(shuō)來(lái)反相液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱能夠反沖時(shí)，才能夠反沖除掉留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速下降柱效。
(7)選擇運(yùn)用適合的活動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)能夠在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，剖析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使活動(dòng)相在進(jìn)入剖析柱之前預(yù)先被硅膠“飽滿”，避免剖析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需求對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)維護(hù)柱。維護(hù)柱一般是填有類(lèi)似固定相的短柱。維護(hù)柱能夠并且應(yīng)該經(jīng)常替換。
(9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖刷色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路體系中活動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐步過(guò)渡，每種活動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即慣例剖析需求50-75mL。
(10)保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
(11)反相液相色譜柱運(yùn)用過(guò)程中，假如壓力升高，一種或許是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)替換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種或許是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；假如柱效下降或色譜峰變形，則或許柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
(12)在完成別離剖析工作之后，不該當(dāng)即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜剖析體系進(jìn)行沖刷，一般0.5h以上，以除掉色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
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