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高效液相色譜(2)-島津LC2010A/C型高效液相色譜儀操作規(guī)程

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時(shí)間:2018-03-23 16:27:09


1 儀器組成與開機(jī)

1.1 本儀器由Class-VP工作站、在線脫氣機(jī)、輸液泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和檢測器等部件組成。各部分的操作均可由工作站或液晶面板控制完成。

1.2 分別打開計(jì)算機(jī)、LC-2010A/C高效液相色譜儀的電源開關(guān)。

1.3 儀器約需3min時(shí)間完成自檢過程,此時(shí)雙擊【Class-VP】快捷方式圖標(biāo)后,雙擊【Instrument l】可進(jìn)入聯(lián)機(jī)狀態(tài);雙擊【Offline Processing】可進(jìn)入脫機(jī)狀態(tài)(聯(lián)機(jī)狀態(tài)下可實(shí)現(xiàn)計(jì)算機(jī)對(duì)儀器的操縱控制以及在線據(jù)的采集和分析;脫機(jī)狀態(tài)下可實(shí)現(xiàn)已采集數(shù)據(jù)的處理和再分析)。

1.4 在聯(lián)機(jī)狀態(tài)下,計(jì)算機(jī)屏幕顯示Class-VP 6.12工作站畫面,此時(shí)得用工具欄上的【Auto Purge】按鈕對(duì)儀器管路進(jìn)行徹底的沖洗并排除可能存在的氣泡,【Auto Purge】功能將按照操作者的設(shè)置自動(dòng)進(jìn)行和停止(本機(jī)為四元低壓梯度系統(tǒng),分為A、B、C、D、R五個(gè)流路并配有五路在線脫氣機(jī)。其中R流路為自動(dòng)進(jìn) 樣器的清洗流路。在進(jìn)行Purge時(shí),可以只選擇所需要的流路進(jìn)行Purge,但第R路是必選項(xiàng))。

2 分析方法的建立、存儲(chǔ)和調(diào)用

2.1 分析方法的建立

2.1.1 單擊菜單欄中的【File→Method→New】以便建立一種新方法。

2.1.2 此時(shí)【LC Setup Assistant-System】對(duì)話框?qū)@示當(dāng)前的分析方法名為Untitled.met,單擊【Simple Setting】可進(jìn)行常規(guī)分析條件的設(shè)定;單擊【Method→Instrument Setup】可進(jìn)行復(fù)雜分析條件的設(shè)定。

2.1.3 利用【Simple Setting】進(jìn)行常規(guī)分析條件的設(shè)定在Mode中選擇“Low Prerrure Gradient”;在Pump框中設(shè)定流速、各流路(通道)的比例、最大最小壓力限;在【Oven】框中設(shè)定柱溫;確保【Detector A】復(fù)選項(xiàng)被選中后,在其中設(shè)定所需的檢測波長;在【Time Program】中設(shè)定液相停止時(shí)間以及采集停止時(shí)間(一般情況下二者一致??蛇x擇【LC Stop】時(shí)間后,單擊【Apply to All Aequisition Time】按鈕使二者一致)。單擊【Download】按鈕,使所設(shè)定的分析條件成為當(dāng)前分析方法(每當(dāng)完成一種新的設(shè)定后,一般均應(yīng)執(zhí)行此步驟,后不贅 述)。此時(shí),若儀器的系統(tǒng)控制器沒有打開,可單擊工具欄上的【Instrument On/Off】按鈕,儀器將按照所設(shè)定的條件開始進(jìn)行。

2.1.4 利用【Method】→【Instrument Setup】進(jìn)行復(fù)雜分析條件的設(shè)定該部分中可對(duì)泵、柱溫、檢測器、系統(tǒng)控制器、時(shí)間程序等組件或程序進(jìn)行更進(jìn)一步的設(shè)定和控制。如:設(shè)定檢測器的靈敏度、D2燈的開關(guān)、梯度洗脫程序的設(shè)定等。

2.1.5 峰/組表(Peak/Group Tables)的設(shè)定

2.1.5.1 打開校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜文件,點(diǎn)擊積分事件工具欄中的【Define Peaks】按鈕,按狀態(tài)欄的提示進(jìn)行操作,將要校準(zhǔn)的峰(此處即為校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰)的保留時(shí)間及保留時(shí)間窗口添加到峰表中。

2.1.5.2 選擇【Method】→【Peak/Group Tables】打開峰表。在峰表中輸入要校準(zhǔn)的峰的相關(guān)信息,其中【ID】、【Ret Time】Window已自動(dòng)添加,其他需要輸入的內(nèi)容為:【Name】 (組分峰的名稱)、【ISTD ID#】(內(nèi)標(biāo)峰的ID號(hào))、【Units】(報(bào)告結(jié)果的濃度單位)、【Analysis Channel】(選擇所用的檢測通道)、【Fit Type】(選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線的類型,如點(diǎn)到點(diǎn)、線性、二次曲線等方式)、【Zero】(選擇后強(qiáng)制校準(zhǔn)曲線通過零點(diǎn))、【Calib Flag】(選擇Weight Average)、【Level 1~10】(輸入各組分中每份校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量及其內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量)等。

2.2 分析方法的存儲(chǔ)

分析方法建立后應(yīng)及時(shí)利用菜單欄中的【File→Method→Save(Save As)】或單擊常用工具欄中的保存按鈕進(jìn)行存儲(chǔ)。分析方法一般建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP\Methods中或其他個(gè)人文件夾中(無論新建還是調(diào)用 一種方法,在對(duì)方法本身做了任何的設(shè)定或改動(dòng)后均應(yīng)隨時(shí)點(diǎn)擊常用工具欄中的保存按鈕,以防信息丟失!后不贅述)。

2.3 分析方法的調(diào)用

如果想調(diào)用一種已存的分析方法,單擊菜單欄中的【File→Method→Open】后,選中所需的分析方法并單擊“打開”。此時(shí),【LC Setup Assistant-System】對(duì)話框中將顯示所打開的分析方法名,其中操作同2.1。

3 供試品分析

3.1 建立或調(diào)用一種分析方法(詳見2)。

單擊菜單欄中【File→Method→Open】,選中所需要的分析方法并單擊“打開”,單擊【Download】按鈕,若儀器的系統(tǒng)控制器沒有打開,可單擊工具欄上的【InstrumentON/OFF】按鈕,此時(shí)儀器將按照所選定的分析方法條件開始運(yùn)行。進(jìn)樣采集前可以按動(dòng)工具欄上的【Zero Detector】按鈕將檢測器的基線手動(dòng)回零(本機(jī)具有采集時(shí)自動(dòng)回零功能,此項(xiàng)亦可不做)。

3.2 單次進(jìn)樣采集分析

當(dāng)色譜柱和檢測器已充分平衡和穩(wěn)定后,單擊【Single Run】按鈕,在出現(xiàn)的對(duì)話框中規(guī)定方法文件名(該名稱應(yīng)與您所建立或調(diào)用的方法文件名一致)、數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)路徑(建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP \Data\hplc中或其他個(gè)人文件夾中)、數(shù)據(jù)文件名、自動(dòng)進(jìn)樣器的瓶號(hào)(樣品架位號(hào))(如果采用的是140位的樣品架,則樣品架位號(hào) 為:10001~10070,為左位樣品架1L;20001~20070,為右位樣品架2R,進(jìn)樣體積(μL)。單擊【Start】,儀器開始單次進(jìn)樣采 集分析,此時(shí)出現(xiàn)采集畫面,采集完畢可以進(jìn)行色譜峰的自動(dòng)或手動(dòng)分析。重復(fù)上述步驟進(jìn)行下一次單次進(jìn)樣采集分析。

3.3 序列(多次)進(jìn)樣采集分析

3.3.1 序列(Sequence)的建立、存儲(chǔ)和調(diào)用

3.3.1.1 序列(Sequence)的建立單擊菜單欄中的【File】→【Sequence】→【New】,出現(xiàn)【New Sequence】對(duì)話框,在此規(guī)定方法文件名、數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)路徑、數(shù)據(jù)文件名、自動(dòng)進(jìn)樣器的瓶號(hào)范圍(開始瓶號(hào)和結(jié)束瓶號(hào))、進(jìn)樣體積、重復(fù)進(jìn)樣次數(shù)等 信息(原則同3.2)。 單擊【OK】后,出現(xiàn)序列(Sequence)列表,在此可以進(jìn)行更為詳盡的Sequence編輯。如:【Run Type】(將校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的首次運(yùn)行設(shè)定為【Begin Calibration】和【Clear All Calibration】;將校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行類型均設(shè)為【End Calibration】,則中間的運(yùn)行自動(dòng)變?yōu)椤綜alibration】,供試品的運(yùn)行類型均設(shè)為【Unknown】、【Level】(標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的 Level值應(yīng)與峰表中的Level值相對(duì)應(yīng),依次輸入1~10的水平代碼;供試品的Level值均為0、

Sample Amount】(校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量均輸入1;供試品的量輸入相應(yīng)的具體數(shù)值)、

ISTD Amount】(標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的內(nèi)標(biāo)量均輸入【1】;供試品的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量輸入相應(yīng)的具體數(shù)值)。更為詳盡的參數(shù)輸入?yún)⒁娛褂谜f明書。

3.3.1.2 序列(Sequence)的存儲(chǔ)利用菜單欄中的【File】→【Sequence】→【Save(SaveAs)】或單擊常用工具欄中的【保存】按鈕可對(duì) 當(dāng)前的序列(Sequence)進(jìn)行存儲(chǔ)。建議存儲(chǔ)在C:\Class-VP\ Sequence中或其他個(gè)人文件夾中。

3.3.1.3 序列(Sequence)的調(diào)用單擊菜單欄中的【File→Sequence→Open】,選擇所需要的Sequence,單擊“打開”。

3.3.2 序列(多次)進(jìn)樣采集分析首先要建立或調(diào)用一個(gè)Sequence并單擊菜單欄中的【File】→【Sequence】→【Open】,將所需要的Sequence打開后,單擊【Sequence Run】按鈕,在【Run Range】中選擇“全部”或“部分”的序列范圍,單擊【Start】,儀器將開始序列(多次)進(jìn)樣采集分析。

4 分析數(shù)據(jù)的處理和分析報(bào)告的打印

4.1 分析數(shù)據(jù)的處理和查看

4.1.1 分析數(shù)據(jù)的處理主要看是積分參數(shù)的設(shè)定。在不設(shè)定任何積分參數(shù)的情況下,儀器將按照缺省參數(shù)值進(jìn)行積分處理(儀器的缺省積分參數(shù)值 為:Width=0.2;Threshold=50);如果對(duì)按照儀器的缺省積分參數(shù)值進(jìn)行的數(shù)據(jù)處理結(jié)果不滿意,可單擊菜單欄中的【Method→Integration Events】,進(jìn)行豐富多彩的積分事件的設(shè)置和規(guī)定,設(shè)置后單擊常用工具欄中的【Analyze】按鈕,儀器將按照要求對(duì)數(shù)據(jù)文件進(jìn)行再積分(再處理)。

4.1.2 分析數(shù)據(jù)的查看單擊常用工具欄中的【Report→View→Area?t(A)】按鈕,可隨時(shí)查看數(shù)據(jù)文件的百分面積報(bào)告結(jié)果。

4.2 分析報(bào)告的打印

4.2.1 數(shù)據(jù)文件的打開單擊菜單欄中【File→Data→Open】,選擇所需要的數(shù)據(jù)文件,單擊【打開】。

4.2.2 分析報(bào)告的打印單擊常用工具欄中的【Report→Print→Area?t(A)】按鈕,可隨時(shí)打印數(shù)據(jù)文件的百分面積報(bào)告結(jié)果。還可以利用菜單欄中的

Method→Custom→Report】來編輯和打印內(nèi)容更為豐富的用戶報(bào)告。

4.3 分析數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)(另存)

儀器所采集的數(shù)據(jù)文件是自動(dòng)存儲(chǔ)的,包括對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行的再積分或再處理。但如果希望原有的數(shù)據(jù)文件不至于被處理后的文件所覆蓋,單擊菜單欄中【File→Data→Save As】或單擊常用工具欄中的【保存】按鈕即可完成相應(yīng)的工作。

5 色譜柱的沖洗

5.1 分析工作結(jié)束后,必須對(duì)色譜柱進(jìn)行充分的沖洗。

對(duì)于常用的反相色譜柱,一般分別以純水和純甲醇(或乙腈)代替原流動(dòng)相中的水相(如緩沖溶液)和有機(jī)相,按原流動(dòng)相比例,在1ml/min的流速下,沖洗60min;再以甲醇為流動(dòng)相沖洗30min。

5.2 在對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗的過和程中,為延長D2燈的使用壽命,可將其關(guān)閉。

方法為:單擊菜單欄中的【File→Method→InstrumentSetup→Detector→Lamp→Off】。

5.3 利用Sequence Run的運(yùn)行,可實(shí)現(xiàn)色譜柱的自動(dòng)沖洗。

方法是在Sequence中的最后一行加入一個(gè)事先編好的沖柱方法文件,或利用“Shut Down”的方法將一個(gè)事先編好的沖柱方法作為Shut Down文件。

6 關(guān)機(jī)

6.1 手動(dòng)關(guān)機(jī)

分析工作結(jié)束,并且色譜柱已充分沖洗完畢后,依次單擊工具欄中的【Turn Pumps On/Off】、【Instrument On/Off】按鈕,依次關(guān)閉畫面中的各個(gè)Windows界面并退出Class-VP工作站軟件;依次關(guān)閉儀器、計(jì)算機(jī)的電源開關(guān)。

6.2 自動(dòng)關(guān)機(jī)

 機(jī)可以實(shí)現(xiàn)無人自動(dòng)關(guān)機(jī)。點(diǎn)擊【Shut Down】按鈕后出現(xiàn)Shut Down條件對(duì)話框,在其中選擇Shut Down文件(應(yīng)選擇色譜柱沖洗文件作為Shut Down文件),在【Cool Down Time】中規(guī)定一個(gè)時(shí)間,該時(shí)間應(yīng)與沖柱文件的時(shí)間相一致,然后分別規(guī)定所要關(guān)閉的組件名稱,單擊【Run】按鈕即可。

7 注意事項(xiàng)

7.1 2010 A和2010 C兩種型號(hào)的惟一區(qū)別在于2010 C的自動(dòng)進(jìn)樣器樣品架帶有制冷功能,冷卻溫度的設(shè)定在【File→Autosampler→Configuration】中,最低溫度為4℃。

7.2 可利用【File→Method→Print】打印出已打開的方法文件,但其中并不包括2010 C自動(dòng)進(jìn)樣器的溫度,可以在【Method→Properties】中進(jìn)行標(biāo)明。

7.3 本機(jī)及其使用的工作站軟件具有豐富的功能,例如:右鍵菜單、鼠標(biāo)的單雙擊等不同操作方式會(huì)產(chǎn)生不同的功能和效應(yīng),具體可參閱有關(guān)使用說明書。


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