PCR 儀原理及擴增的步驟
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時間:2019-01-04 10:22:24
PCR 儀擴增的步驟
首先將模板 DNA 置于 92℃ -96℃,進行變性(denaturation)處理,使 dsDNA 在高溫下解鏈成為 ssDNA ,且熱變性不改變其化學(xué)性質(zhì);
退火(annealing) ,將溫度降至 37℃ -72℃,使引物與模板的互補區(qū)相結(jié)合;
然后,在 72℃ 條件下, DNA 聚合酶將 dNTP 連續(xù)加到引物的 3'-OH 端,合成 DNA ,這個步驟稱為延伸(extension)。
這三個熱反應(yīng)過程的重復(fù)稱為一個循環(huán),經(jīng)過 20-40 個循環(huán)可擴增得到大量位于兩條引物之間序列的 DNA 片段。
PCR 儀工作原理:
基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。待拷貝的 DNA 稱為模板,它可以是雙鏈 DNA 也可是單鏈DNA,結(jié)果擴增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。引物是 DNA 復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過程中的晶核,引導(dǎo) DNA 的合成。在 PCR 擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 復(fù)制的動力,在 dNTP 等底物存在時在引物的引導(dǎo)下沿著模板 DNA 合成互補的 DNA 鏈。
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