等電聚焦電泳色譜儀pH值梯度不穩(wěn)定可能的七種原因
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質(zhì)分子或其它兩性分子的等電點(diǎn)不同，在一個(gè)穩(wěn)定的、連續(xù)的、線(xiàn)性的pH梯度中進(jìn)行分離。等電聚焦電泳技術(shù)在不斷進(jìn)步，卻一直存在著pH值梯度不穩(wěn)定的現(xiàn)象，即存在著pH梯度的陰極和陽(yáng)極漂移現(xiàn)象。陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過(guò)程。反之，如果其酸性端逐漸消失則稱(chēng)為陽(yáng)極漂移。
等電聚焦電泳（IFE，isoelectric focusing electrophoresis）是一種電泳方法，即利用一種特殊的緩沖液（兩性電解質(zhì)）在凝膠（常用聚丙烯酰胺凝膠）內(nèi)制造一個(gè)pH梯度，電泳時(shí)每種蛋白質(zhì)就將遷移到等于其等電點(diǎn)（pI）的pH處（此時(shí)此蛋白質(zhì)不再帶有凈的正或負(fù)電荷），形成一個(gè)很窄的區(qū)帶。
為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩(wěn)定的機(jī)制，提出了各種假說(shuō)：
一、載體兩性電解質(zhì)向陰、陽(yáng)極的等速電泳遷移。
二、在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度的變化。
三、在pH梯度的中性區(qū)域生成一段純水，水的等電聚焦導(dǎo)致水在電泳柱中的聚集并向兩端反流。
四、不同等電點(diǎn)的載體兩性電解質(zhì)的選擇性缺陷而引起不穩(wěn)定。
五、載體兩性電解質(zhì)帶電配體的結(jié)合或分離而引起不穩(wěn)定。
六、載體兩性電解質(zhì)相互反應(yīng)的存在而引起不穩(wěn)定。
七、相對(duì)遷移的氫離子和氫氧根離子濃度的不平衡。
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